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產(chǎn)地 | 國(guó)產(chǎn) |
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鴿子飛行能力基因檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)使用說(shuō)明書
通用名稱:鴿子飛行能力基因檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)
本試劑盒用于鴿子飛行能力基因定性檢測(cè),可對(duì)鴿子的飛行能力進(jìn)行預(yù)測(cè)。
根據(jù)鴿子飛行能力基因設(shè)計(jì)特異性引物和探針,利用熒光定量PCR技術(shù),通過檢測(cè)熒光的釋放和強(qiáng)度,來(lái)檢測(cè)飛行能力基因。
序號(hào) | 組分 | 標(biāo)示裝量 /管 | 數(shù)量 (管) |
1 | 10 x qPCR Buffer | 400 ul | 1 |
2 | dNTP(2.5mM) | 240 ul | 1 |
3 | Hot Star Taq (5u/ul) | 30 ul | 1 |
4 | LDHA引物探針 | 200 ul | 1 |
5 | DRD4a引物探針 | 200 ul | 1 |
6 | DRD4b引物探針 | 200 ul | 1 |
-20℃避光保存有效期為12個(gè)月;切忌反復(fù)凍融。
1、羽毛:采集胸部或腹部或腿部羽毛2根,切忌使用自然脫落的羽毛。
2、全血:使用EDTA作為抗凝劑,切忌使用肝素抗凝。要求使用新鮮全血,或在2~8℃保存不超過7天,或在-20℃以下保存不超過一個(gè)月,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融。
1、樣本處理與核酸提取,具體操作參照相關(guān)操作說(shuō)明書。
(1)0.2ml PCR管中,加入羽毛2-4根,加入Reagent A 20ul(注意淹沒樣本),99℃加熱20分鐘;
(2)向上一步的Pcr管中加入Reagent B 100ul,5000rpm離心30秒-1分鐘,備用;
2、儀器準(zhǔn)備將每臺(tái)儀器接通電源,檢查是否運(yùn)轉(zhuǎn)正常。
3、物品準(zhǔn)備:離心機(jī)、冰盒、移液器、吸頭;試劑準(zhǔn)備(未分裝規(guī)格使用):將PCR反應(yīng)液解凍、混勻,瞬時(shí)離心后分裝14µL/管。
序號(hào) | 組分 | 用量 | 反應(yīng)液 |
1 | 10 x qPCR Buffer | 2 ul |
14ul反應(yīng)液 |
2 | dNTP(2.5mM) | 1.6 ul | |
3 | Hot Star Taq (5u/ul) | 0.2 ul | |
4 | 去離子水 | 10.2 ul |
管號(hào)1 | 管號(hào)2 | 管號(hào)3 |
14ul反應(yīng)液 | 14ul反應(yīng)液 | 14ul反應(yīng)液 |
4ul LDHA引物探針 | 4ul DRD4a引物探針 | 4ul DRD4b引物探針 |
2ul DNA模板 | 2ul DNA模板 | 2ul DNA模板 |
4、 PCR擴(kuò)增條件(反應(yīng)體系為20μL)
擴(kuò)增溫度 | 擴(kuò)增時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
95℃ | 5min | 1 |
95℃ | 15sec | 40 cycles |
60℃ | 30sec(采集熒光)FAM及VIC |
5、熒光定量檢測(cè)
結(jié)果判定
反應(yīng)液 | 飛行能力基因 基因型 | ||
野生基因型 | 雜合基因型 | 突變基因型 | |
管號(hào)1 LDHA基因 | GG | AG | AA |
管號(hào)2 DRD4a基因 | CC | CT | TT |
管號(hào)3 DRD4b基因 | CC | CT | TT |
FAM VIC信號(hào)判斷 | VIC<33,FAM無(wú)ct | FAM-VIC絕對(duì)值<3 | FAM<33,VIC無(wú)ct |
備注 | FAM可能有ct,FAM-VIC絕對(duì)值>5 | VIC可能有ct,FAM-VIC絕對(duì)值>5 |
本方法只適用于鴿子飛行能力基因檢測(cè)。
1. 特異性:對(duì)特異性參考品進(jìn)行檢測(cè),所有參考品檢測(cè)結(jié)果陰性。
2. 準(zhǔn)確性:對(duì)檢測(cè)范圍內(nèi)的不同基因型的參考品進(jìn)行檢測(cè),能檢出相應(yīng)基因型。
3. 檢出限:應(yīng)不高于5ng/µL。
4. 重復(fù)性:檢測(cè)范圍內(nèi)的不同基因型的重復(fù)性參考品,每個(gè)參考品進(jìn)行10次檢測(cè),結(jié)果能準(zhǔn)確分型,且相應(yīng)檢測(cè)結(jié)果Ct值的變異系數(shù)(CV)應(yīng)≤5.0%。
5. 有效期:試劑盒于-20避光保存,有效期為12個(gè)月。
1. 本試劑盒僅鴿子飛行能力基因體外檢測(cè)。有關(guān)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范嚴(yán)格按照行政主管部門頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)定執(zhí)行。
2. 試劑盒應(yīng)低溫運(yùn)輸和保存,試劑盒內(nèi)各試劑使用前,請(qǐng)短暫離心。
3. 檢測(cè)時(shí),提取樣本必須在生物安全柜中進(jìn)行,且使用時(shí)要注意橫向污染。
4. 實(shí)驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作:第一區(qū):試劑制備區(qū)—準(zhǔn)備擴(kuò)增所需試劑;
第二區(qū):樣本處理區(qū)—待測(cè)樣本和對(duì)照品處理;
第三區(qū):PCR擴(kuò)增區(qū)—PCR擴(kuò)增檢測(cè)。
本產(chǎn)品為一次性用品,使用后的試劑盒和樣本等廢棄物應(yīng)作為傳染源按照國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)處理。
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